ELISA 檢測試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會，只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐，因此需經擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么 ELISA 檢測試劑盒反應總是需要一定時間的溫育。
溫育常采用的溫度有 43 ℃、37 ℃、室溫和 4 ℃（冰箱溫度）等。37 ℃ 是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在建立 ELISA 方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩次抗原抗體反應一般在 37 ℃ 經 1～2 小時，產物的生成可達。為加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在 43 ℃ 進行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應 4 ℃ 更為好，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中，以形成 zui 多的沉淀。但因所需時間太長，在 ELISA 檢測試劑盒中一般不予采用。
Elisa 試劑盒保存條件：
1) 未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將標準品、檢測溶液 A、檢測溶液 B 以及 96 孔板保存于 -20 ℃。
2) 使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于 - 20 ℃，避免潮濕。
